การหาปริมาณสารตกค้างกลุ่มเบต้าอะโกนิสต์ในเนื้อหมูโดยใช้ระบบ Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Wayeal LCMS-TQ9200

การทดลองนี้หมายถึง "GB 3165822-2022 National Food Safety Standard — Determination of β-Agonist Residues in Animal-Derived Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" and utilizes the Wayeal LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry system to determine the content of β-agonists in porkผลการทดลองชี้ให้เห็นว่าการทดสอบความเหมาะสมของระบบแสดงให้เห็นถึงจุดสูงที่มีรูปร่างดีและเส้นตรงที่ดี ซึ่งตอบสนองความต้องการในการทดลองการซ้ําซ้ําระยะเวลาในการเก็บรักษาสําหรับสารแก้ไขการทํางานแบบมาตรฐานของ β- agonist ต่ํากว่า 1%สําหรับสารแก้ไขการทดสอบความรู้สึกของ β- agonists อัตราส่วนสัญญาณต่อเสียงของจุดสูงหลักในปริมาณ.2ng/mL และ 0.5ng/mL มากกว่า 3 และ 10 อย่างมีนัยสําคัญ ตามลําดับ ซึ่งตอบสนองความต้องการการทดลอง

ไม่มี β-agonists ถูกตรวจพบในการทดสอบตัวอย่างหมูทั้งหมดของข้อมูลด้านบนตอบสนองความต้องการเครื่องมือที่กําหนดโดยวิธีมาตรฐาน.

คําสําคัญ:โครมาโตเกอรี่เหลว-เทนเดมมัสสเปคเตอร์เมตร; β- อากอนิสต์; คเลนบุเตโรล; ความปลอดภัยของอาหาร

1อุปกรณ์และสารแก้ไข

1.1 รายการการตั้งค่าของ LCMS

ตารางที่ 1 รายการการตั้งค่าเครื่องมือ

1.2 ตัวปฏิกิริยาและมาตรฐาน

ตารางที่ 2 รายการของสารปฏิกิริยาและมาตรฐาน

1.3 วัสดุการทดลองและอุปกรณ์ช่วย

เครื่องทําความสะอาด ultrasonic

เครื่องผสมเวอร์เท็กซ์

น้ําอาบน้ํา อุณหภูมิคงที่

เซ็นทริฟิวเกอร์ความเร็วสูง

2วิธีการทดลอง

2.1 การรักษาตัวอย่างก่อน

2.1.1 ไฮดรอลิสส์และการสกัดออกด้วยอินไซม์

น้ําหนัก 2 กรัมของตัวอย่าง (แม่นยํา ± 0.05 กรัม) ลงในหลอดเซ็นทริฟิวจ์ 50 มิลลิตร เพิ่ม 6 มิลลิตรของ 0.2 โมล / ลิตรของแอมโมเนียมอะเซเทตสารแก้วพัฟเฟอร์และ 40 มิลลิตรของ β-กลูคูรอนิดาซ / อาริลซัลฟาเตซและปลูกในอุณหภูมิ 37 °C ในที่มืด โดยสั่นในน้ําอาบน้ําเป็นเวลา 16 ชั่วโมง.ปล่อยให้เย็นถึงอุณหภูมิห้อง เพื่อใช้ต่อ

2.1.2 การสกัด, การทําความสะอาด และการปม

นําสารละลายที่ได้รับการเตรียมไว้, เพิ่ม 100μL ของสารละลายการทํางานแบบมาตรฐานภายใน 100ng/mL, หมุนเวียนเพื่อผสมให้ละเอียด, และระบายศูนย์กลางที่ 8000r/นาทีเป็นเวลา 8 นาที. เก็บสารละเอียด, เพิ่ม 5mL ของ 0.1mol/L ของสารละลายกรดเพอร์คลอริกผสมผสานและปรับ pH ให้เป็น 1.0 ± 0.2 โดยใช้กรดเพอร์คลอริก หลังจากทําเซ็นทรีฟูเกชั่นที่ 8000 r/min เป็นเวลา 8 นาที ปรับ pH ของสารที่อยู่เหนือกรดให้เป็น 10 ± 05 โดยใช้สารละลายซาเดียมไฮโดรออกไซด์ 10mol/L. เพิ่ม 15mL ของเอธิลเอซิตาท, สั่นด้วยความเร็วปานกลางเป็นเวลา 5 นาที, centrifuge ที่ 5000 r / นาทีเป็นเวลา 5 นาที. เก็บชั้นอินทรีย์ชั้นบน. ไปยังชั้นน้ําที่เหลือ,เพิ่ม 10mL ของ tert-butyl methyl ether, สั่นด้วยความเร็วปานกลาง 5 นาที, หลุดศูนย์กลางที่ 5000 r / นาที 5 นาที, และรวบรวมชั้นอินทรีย์บน. รวมชั้นอินทรีย์ทั้งหมดและระเหยจนแห้งภายใต้กระแสไนโตรเจนที่ 50 °Cโปรดละลายส่วนเหลือใน 5 ml ของสารละลายกรดมูรมิค 2% และวางไว้ข้างๆ. เตรียมคอลัมน์การสลับแคทีออนแบบผสมผสานด้วยการกระตุ้นมันอย่างลําดับด้วย 3 ml ของเมธาโนลและ 3 ml ของกรดมุม 2% เติมละลายที่ได้รับการเตรียมไว้บนคอลัมน์ล้างตามลําดับด้วยกรดมูรมิค 2% 3mL และเมธาโนล 3mL, และแห้งภายใต้ล้างสว่าง. ละลายคอลัมน์ด้วย 3mL ของสารละลายเมธาโนลอะโมเนียม 5% ละลายเอลูเอตระเหยจนแห้งภายใต้กระแสไนโตรเจนที่ 50 °C ยาเหลือใน 0.5mL ของเมธาโนลโซลูชั่นกรดมด 1% (10:90, v/v) ผสมให้ละเอียด และกรองผ่านเยื่อไมโครโพโรสขนาด 0.22μm เพื่อวิเคราะห์ด้วยการวัดขนาดของสารเหลว

2.2 สภาพการทดลอง

2.2.1 สภาพการจารึกจารึกของสารเหลว

คอลัมน์โครมาโตเกอรี่ C18, 1.8μm 2.1*100mm

โฟเซสเคลื่อนไหว: A: 0.1% กรดมุมในน้ํา; B: เมธาโนล

อัตราการไหล: 0.3 mL/นาที

อุณหภูมิคอลัม: 40°C

ปริมาณการฉีด: 3μL

3การทดสอบความเหมาะสมของระบบ

การทดสอบความเหมาะสมของระบบแสดงให้เห็นว่ายอดเป้าหมายมีรูปร่างดี โดยไม่มีการขัดแย้งจากยอดปนเปื้อนอื่น ๆ ซึ่งตอบสนองความต้องการในการทดลอง

รูปที่ 1 โครมาโตแกรมการทดสอบ β-Agonist 7 ตัว (1ng/mL)

3.2 ระยะทางเส้น

โดยใช้สารแก้ไขแบบมาตรฐานของ β-agonist และใช้สารแก้ไขที่ทํางานที่มีปริมาณระยะกลาง การคอร์ฟแบบมาตรฐานถูกจัดทําเป็นระยะโดย R2 > 0.99, แสดงถึงความสัมพันธ์เชิงเส้นที่ดี

ตารางที่ 3 ตารางระยะเส้นสําหรับ β-agonists

รูปที่ 2 โครมาโตแกรมเส้นโค้งมาตรฐานของเจ็ด β-Agonist

3.3 ขอบเขตการตรวจสอบ (LOD) และขอบเขตปริมาณ (LOQ)

ในวิธีนี้, ขีดจํากัดการตรวจพบ (LOD) และขีดจํากัดปริมาณ (LOQ) สําหรับ β-agonists ถูกกําหนดเป็น 0.2ng/mL และ 0.5ng/mL ตามลําดับ สําหรับส่วนผสมแต่ละส่วนในวิธีนี้,อัตราการสัมพันธ์สัญญาณกับเสียงที่ระบุไว้สําหรับ LOD และ LOQ มากกว่า 3 และ 10, ตามลําดับที่ตอบสนองความต้องการความรู้สึกในการทดลอง

ตารางที่ 4 อัตราสัมพันธ์สัญญาณกับเสียงสําหรับ LOD และ LOQ ของสารประกอบแต่ละสาร

รูปที่ 3 โครมาโตกรามไอออนของ β-Agonists เจ็ดที่ LOD และ LOQ ความเข้มข้น

3.4 การทดสอบความแม่นยํา

มีการนําสารละลายผสมของสารมาตรฐาน β- agonist ในปริมาณต่ํา, กลางและสูง และฉีดติดต่อกัน 6 ครั้ง เพื่อเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาและการเบี่ยงเบนพื้นที่สูงสุดผลปรากฏในตารางด้านล่างผลกระทบที่เกิดขึ้นกับ β- agonists ทั้งหมดแสดงให้เห็นว่าความหันห่างในเวลาการเก็บรักษาที่ต่ํากว่า 1% และความหันห่างในพื้นที่สูงสุดที่ต่ํากว่า 3% ซึ่งตรงกับความต้องการในการทดลอง

ตารางที่ 5 การทดสอบความแม่นยําสําหรับสารประกอบแต่ละสาร

รูปที่ 4 โครมาโตแกรมการทดสอบแม่นยําของ β-agonist 7 ชิ้น (6 การฉีด)

3.5 การทดสอบตัวอย่าง

ตัวอย่างเนื้อหมูที่ซื้อจากตลาดถูกทดสอบตามวิธีการรักษาก่อนที่กล่าวไว้ และไม่มี β-agonists พบไม่พบจุดสูงของโครมาโตเกราฟิคในเวลาการเก็บรักษาที่ตรงกับ, ขณะที่จุดสูงอื่น ๆ หมายถึงสัญญาณเมทริกซ์หลังจากการไฮดรอลิสส์ทางอินไซเมต

รูปที่ 5 โครมาโตแกรมการทดสอบตัวอย่างหมู

4สรุป

วิธีนี้ใช้ Wayeal LCMS-TQ9200 ระบบจุลสีเหลว-เทนเดมมัสสเปคโทรเมตรสําหรับการกําหนด β-agonists ในหมูข้อมูลแสดงให้เห็นว่าจุดสูงของโครมาโทเกราฟิกทั้งหมดมีรูปร่างดี โดยไม่ต้องมีรอย, ความรู้สึกตอบสนองความต้องการการทดลอง, ตัวประกอบความสัมพันธ์เชิงเส้นมากกว่า 099, และความแม่นยําเป็นอย่างพึงพอใจ กับการหันห่างในเวลาการเก็บรักษาที่ต่ํากว่า 1% และการหันห่างในพื้นที่สูงสุดใน 3% สําหรับการฉีดยา 6 ครั้งติดต่อกันของแต่ละส่วนผสมไม่พบ β-agonists ในการทดสอบตัวอย่างหมูผลการตรวจนี้แสดงให้เห็นว่าวิธีการที่มีระบบ Wayeal LC-MS/MS ตอบสนองความต้องการการตรวจหาทางคุณภาพและปริมาณประจําสําหรับตัวแอนาลิตเป้าหมาย