การกําหนดปริมาณเอธีลมัลโตลในน้ํามันหอมโซยา โดย Wayeal LCMS-TQ9200 Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry System

เอทิลมอลทอลถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในอุตสาหกรรมอาหารในฐานะสารเพิ่มรสชาติและปรับปรุงรสชาติที่มีประสิทธิภาพสูงและครอบคลุมหลากหลายสเปกตรัม เพื่อเพิ่มความเข้มข้นและทำให้เกิดความกลมกลืนของรสชาติหวาน ผลไม้ และครีมในผลิตภัณฑ์อาหาร ตามมาตรฐานความปลอดภัยด้านอาหารแห่งชาติของจีนสำหรับการใช้สารปรุงแต่งอาหาร (GB 2760–2024) อนุญาตให้ใช้เอทิลมอลทอลในระดับที่เหมาะสมตามความต้องการในการผลิตในประเภทอาหารเฉพาะ

อย่างไรก็ตาม เนื่องจากเอทิลมอลทอลสามารถปกปิดรสชาติที่ไม่พึงประสงค์จากการเกิดออกซิเดชันในน้ำมันได้อย่างมีประสิทธิภาพและช่วยเพิ่มรสชาติ จึงเกิดเหตุการณ์ซ้ำแล้วซ้ำเล่าในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมาเกี่ยวกับการเติมสารดังกล่าวลงในน้ำมันพืชที่บริโภคได้โดยไม่ได้รับอนุญาต รวมถึงน้ำมันถั่วเหลือง ดังนั้น การสร้างวิธีการวิเคราะห์ที่แม่นยำ ไว และมีประสิทธิภาพสำหรับการตรวจสอบการเติมเอทิลมอลทอลในน้ำมันถั่วเหลืองและน้ำมันที่บริโภคได้อื่นๆ อย่างผิดกฎหมายจึงมีความสำคัญในทางปฏิบัติอย่างมากในการรับรองความปลอดภัยของอาหาร ปกป้องสิทธิของผู้บริโภค และรักษาความเป็นระเบียบเรียบร้อยของตลาด

น้ำมันถั่วเหลืองมีองค์ประกอบเมทริกซ์ที่ซับซ้อน ซึ่งส่วนใหญ่ประกอบด้วยไตรกลีเซอไรด์ กรดไขมันอิสระ ฟอสโฟลิพิด และโทโคฟีรอลตามธรรมชาติ ส่วนประกอบเหล่านี้ที่อยู่ร่วมกันสามารถทำให้เกิดการรบกวนเมทริกซ์อย่างมีนัยสำคัญในระหว่างการวิเคราะห์ ซึ่งส่งผลกระทบอย่างรุนแรงต่อการตรวจจับสารวิเคราะห์เป้าหมายเอทิลมอลทอล เทคนิค Liquid chromatography–tandem mass spectrometry ผสมผสานความสามารถในการแยกที่ดีเยี่ยมของ liquid chromatography เข้ากับความจำเพาะสูงและความไวสูงของ tandem mass spectrometry เทคนิคนี้ได้กลายเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการวิเคราะห์และระบุสารเติมแต่งที่ผิดกฎหมายในผลิตภัณฑ์อาหาร

คำสำคัญ:LCMS, น้ำมันถั่วเหลือง, เอทิลมอลทอล

1. เครื่องมือและน้ำยา

1.1 รายการการกำหนดค่าของ LCMS

ตารางที่ 1 รายการการกำหนดค่าเครื่องมือ

1.2 น้ำยาและสารมาตรฐาน

ตารางที่ 2 ตารางน้ำยาและสารมาตรฐาน

1.3 วัสดุทดลองและอุปกรณ์เสริม

เครื่องทำความสะอาดด้วยคลื่นเสียง

เครื่องผสมแบบวน

เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง

2. วิธีการทดลอง

2.1 สภาวะ Liquid Chromatography

คอลัมน์: C18, 1.7 μm, 2.1×50 mm

เฟสเคลื่อนที่: A: กรดฟอร์มิก 0.1% ในน้ำ; B: กรดฟอร์มิก 0.1% ในเมทานอล

อัตราการไหล: 0.3 มล./นาที

อุณหภูมิคอลัมน์: 40 ℃

ปริมาณการฉีด: 2μL

2.2 วิธีการปรับสภาพเบื้องต้น

ชั่งน้ำหนักตัวอย่าง 10 กรัมอย่างแม่นยำ (แม่นยำถึง 0.01 กรัม) และถ่ายโอนลงในหลอดเซนตริฟิวส์โพลีโพรพิลีนขนาด 50 มล. เติมเมทานอล 10 มล. อย่างแม่นยำโดยใช้ปิเปตต์, วนเป็นเวลา 2 นาที และหมุนเหวี่ยงที่ 9,000 รอบต่อนาที/นาที เป็นเวลา 10 นาที ที่ 4°C ถ่ายโอนส่วนใสลงในหลอดทดลองแบบมีฝาปิดขนาด 20 มล. ทำซ้ำการสกัดชั้นน้ำมันที่เหลือด้วยเมทานอลอีก 10 มล. รวมส่วนใส และเจือจางเป็น 20 มล. ด้วยเมทานอล กรองสารละลายผ่านเมมเบรนขนาดเล็ก (0.22μm, เฟสอินทรีย์) และใช้สำหรับการวิเคราะห์ liquid chromatography-tandem mass spectrometry

2.3 การเตรียมสารละลาย

2.3.1 สารละลายมาตรฐานเอทิลมอลทอล: 100μg/mL

2.3.2 สารละลายทำงานมาตรฐานเอทิลมอลทอล:เจือจางสารละลายสต็อกมาตรฐานเอทิลมอลทอลแบบเป็นขั้นๆ ด้วยเมทานอลเพื่อเตรียมสารละลายมาตรฐานที่มีความเข้มข้น 1.25μg/mL, 2.5μg/mL, 5μg/mL, 25μg/mL และ 50μg/mL ชั่งน้ำหนักตัวอย่างลบ 10 กรัมอย่างแม่นยำ (แม่นยำถึง 0.01 กรัม) ที่สอดคล้องกับตัวอย่างทดสอบ เติมสารละลายมาตรฐานแต่ละชนิด 200μL และดำเนินการผสมพร้อมกันกับตัวอย่างทดสอบผ่านการสกัด จากนั้นเตรียมสารละลายทำงานที่มีความเข้มข้นสุดท้าย 12.5ng/mL, 25ng/mL, 50ng/mL, 250ng/mL และ 500ng/mL เตรียมสารละลายเหล่านี้ทันทีก่อนใช้งาน

2.3.3 สารละลายกรดฟอร์มิก 0.1% ในน้ำ:นำกรดฟอร์มิก 1 มล. และเจือจางเป็น 1000 มล. ด้วยน้ำ กรองผ่านเมมเบรน (0.22μm, เฟสน้ำ) ก่อนใช้งาน

2.3.4 กรดฟอร์มิก 0.1% ในสารละลายเมทานอล:นำกรดฟอร์มิก 1 มล. และเจือจางเป็น 1000 มล. ด้วยเมทานอล กรองผ่านเมมเบรน (0.22μm, เฟสอินทรีย์) ก่อนใช้งาน

3. ผลการทดลอง

3.1 โครมาโตแกรมมาตรฐาน

การกำหนดปริมาณเอทิลมอลทอลเสร็จสิ้นภายใน 7 นาที โดยมีรูปร่างยอดที่ดีและการตอบสนองของสารประกอบ ซึ่งเป็นไปตามข้อกำหนดของการวิเคราะห์เชิงทดลอง

รูปที่ 1 โครมาโตแกรมเอทิลมอลทอล (250ng/mL)

3.2 ช่วงเชิงเส้น

เตรียมเส้นโค้งมาตรฐานผ่านการเจือจางสารละลายมาตรฐานเอทิลมอลทอลแบบอนุกรม ช่วงเชิงเส้นคือ 12.5–500ng/mL โดยมีความเบี่ยงเบนระหว่างผลการตรวจจับเชิงเส้นและความเข้มข้นที่ทราบค่าน้อยกว่าค่าเบี่ยงเบนสูงสุดที่อนุญาต ค่า R² ทั้งหมดเกิน 0.9999 ซึ่งบ่งบอกถึงความเป็นเส้นตรงที่ดีเยี่ยม

ตารางที่ 3 ตารางช่วงเชิงเส้นของสารประกอบ

รูปที่ 2 ผลลัพธ์ความเป็นเส้นตรงของสารประกอบ

3.3 LOD และ LOQ

ในวิธีนี้ อัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวน (S/N) ของเอทิลมอลทอลที่ 12.5ng/mL นั้นมากกว่า 10 อย่างมีนัยสำคัญ เมื่อ S/N = 10 ถูกกำหนดให้เป็นขีดจำกัดเชิงทฤษฎีของการหาปริมาณ (LOQ) และ S/N = 3 ถูกกำหนดให้เป็นขีดจำกัดเชิงทฤษฎีของการตรวจจับ (LOD) ขีดจำกัดการตรวจจับ (LOD) ที่คำนวณได้คือ 1.07ng/mL และขีดจำกัดการหาปริมาณ (LOQ) คือ 3.56ng/mL

ตารางที่ 4 LOQ และ LOQ ของสารประกอบ

สารประกอบ	อัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวน (S/N)	ขีดจำกัดการตรวจจับ (ng/mL)	ขีดจำกัดการหาปริมาณ (ng/mL)
เอทิลมอลทอล	35.079	1.07	3.56

รูปที่ 3 โครมาโตแกรมของสารประกอบ LOQ

3.4 ความแม่นยำ

นำตัวทำละลายเปล่าและตัวอย่างลบไปที่สารละลายมาตรฐานเอทิลมอลทอลเพื่อเตรียมความเข้มข้นสุดท้าย 25ng/mL และฉีดติดต่อกัน 7 ครั้งเพื่อประเมินความแม่นยำ ผลลัพธ์แสดงอยู่ในตารางด้านล่าง RSD ของเอทิลมอลทอลอยู่ภายใน 3% ซึ่งเป็นไปตามข้อกำหนดความแม่นยำมาตรฐานของ ≤15%

ตารางที่ 5 ความแม่นยำของสารประกอบ

สารประกอบ	ตัวอย่าง	RSD
เอทิลมอลทอล	เมทานอลที่เติม	2.407%
	น้ำมันถั่วเหลืองที่เติม	2.915%

รูปที่ 4 โครมาโตแกรมความแม่นยำของตัวอย่างที่เติมเมทานอล

รูปที่ 5 โครมาโตแกรมความแม่นยำของตัวอย่างที่เติมน้ำมันถั่วเหลือง

3.5 อัตราการฟื้นตัว

สารละลายมาตรฐานเอทิลมอลทอล 100μg/mL ถูกเจือจางด้วยน้ำมันถั่วเหลืองเป็น 25ng/mL หลังจากปรับสภาพตัวอย่าง สกัด และกรองแล้ว ทำการฉีดติดต่อกันเจ็ดครั้งเพื่อเปรียบเทียบอัตราการฟื้นตัว ผลลัพธ์แสดงอยู่ในตารางด้านล่าง อัตราการฟื้นตัวของเอทิลมอลทอลคือ 102.53% ซึ่งเป็นไปตามช่วงการฟื้นตัวที่ยอมรับได้ 80%–120%

ตารางที่ 6 อัตราการฟื้นตัวของสารประกอบ

สารประกอบ	ความเข้มข้นที่เติม (ng/mL)	การฟื้นตัว (%)
เอทิลมอลทอล	25	102.53%

3.6 สารตกค้างเปล่า

หลังจากฉีดจุดสูงสุด (500ng/mL) ของเส้นโค้งมาตรฐานแล้ว สารทำปฏิกิริยาเปล่าถูกฉีด ไม่มีการตรวจพบการนำพาเปล่าหลังจากการคำนวณ

รูปที่ 6 โครมาโตแกรมสารตกค้างเปล่า

3.7 การทดสอบตัวอย่าง

หลังจากปรับสภาพเบื้องต้น ตัวอย่างน้ำมันถั่วเหลืองยี่ห้อหนึ่งถูกฉีดและไม่พบสารประกอบเป้าหมาย

รูปที่ 7 โครมาโตแกรมการทดสอบตัวอย่าง

4. บทสรุป

วิธีนี้ใช้ระบบ liquid chromatography-tandem mass spectrometry LCMS-TQ9200 ของ Wayeal สำหรับการกำหนดเอทิลมอลทอลในน้ำมันถั่วเหลือง ข้อมูลแสดงให้เห็นว่ายอดโครมาโตกราฟิกของวิธีแสดงรูปร่างยอดที่ดีโดยไม่มีการลาก และความไวเป็นไปตามข้อกำหนด สัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์เชิงเส้นทั้งหมดมากกว่า 0.9999 ความแม่นยำอยู่ภายใน 3% และอัตราการฟื้นตัวของสไปค์อยู่ในช่วงระหว่าง 100% ถึง 105% ไม่มีการสังเกตการนำพาระบบสำหรับตัวอย่างที่มีความเข้มข้นสูง ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่าวิธีนี้ ซึ่งติดตั้งระบบ LC-MS/MS ของ Wayeal นั้นเป็นไปตามข้อกำหนดการตรวจจับเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณตามปกติสำหรับสารวิเคราะห์เป้าหมายในตัวอย่าง

ระบบ Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS/MS) TQ9200

เครื่องมือ Liquid Chromatography HPLC ที่มีการทำซ้ำการฉีดสูง LC3400 75MPa

ระบบ HPLC แรงดันสูงแบบไอโซเครติก 42MPa ในอุตสาหกรรมยา