การกำหนดเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อะนาล็อก ในอาหารสัตว์ด้วยวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงของ Wayeal

เมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อก (MHA) เป็นสารเติมแต่งกรดอินทรีย์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในอุตสาหกรรมอาหารสัตว์เพื่อทดแทนเมไทโอนีน MHA ถูกนำไปใช้อย่างกว้างขวางในอาหารสัตว์ปีก (ไก่เนื้อและไก่ไข่) สุกร (ลูกสุกรและสุกรขุน) สัตว์เคี้ยวเอื้อง (โคนมและโคเนื้อ) และสัตว์น้ำ (ปลาและกุ้ง) ในฐานะสารทดแทนเมไทโอนีน มันแสดงให้เห็นถึงผลกระทบที่สำคัญในการลดต้นทุนอาหาร ปรับปรุงสภาพแวดล้อมในลำไส้ของสัตว์ และเสริมสร้างภูมิคุ้มกันของสัตว์

โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงร่วมกับการตรวจวัดด้วย UV เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างอาหารสัตว์ที่ซับซ้อนหลากหลายชนิด เนื่องจากมีประสิทธิภาพในการแยกสูง ความต้านทานการรบกวนจากเมทริกซ์ที่แข็งแกร่ง ความไวในการตรวจวัดสูง และผลการวัดปริมาณที่เสถียรและเชื่อถือได้ การทดลองนี้ดำเนินการตามมาตรฐาน "การกำหนดเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อกในอาหารสัตว์ด้วยโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง" (GB/T 19371-2025) ได้ใช้เครื่องโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงรุ่น Wayeal LC3400 series ที่ติดตั้งเครื่องตรวจวัด UV เพื่อตรวจสอบขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างและระบบการแยกและการตรวจวัดด้วยโครมาโทกราฟีของเหลว ทำให้สามารถตรวจวัดเชิงคุณภาพและการวิเคราะห์เชิงปริมาณที่แม่นยำของเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อกในตัวอย่างอาหารสัตว์ประเภทต่างๆ ได้

คำสำคัญ: อาหารสัตว์; เมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อก; โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง

1. เครื่องมือและสารเคมี

1.1 รายการการกำหนดค่า HPLC

ตารางที่ 1 รายการการกำหนดค่าระบบโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง

1.2 รายการสารเคมีและมาตรฐานอ้างอิง

ตารางที่ 2 รายการสารเคมีและมาตรฐานอ้างอิง

1.3 เงื่อนไขโครมาโทกราฟีของเหลว

ตารางที่ 3 เงื่อนไขโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง

1.4 วัสดุทดลองและอุปกรณ์เสริม

เครื่องทำความสะอาดอัลตราโซนิก;

เครื่องผสมแบบวอร์เท็กซ์;

เครื่องปั่นเหวี่ยงความเร็วสูง;

เครื่องชั่งวิเคราะห์;

เครื่องเขย่า

2. วิธีการทดลอง

2.1 การเตรียมสารละลาย

2.1.1 สารละลายมาตรฐานสำหรับสร้างกราฟมาตรฐาน:

ชั่งสารมาตรฐานเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อกในปริมาณที่เหมาะสมอย่างแม่นยำ และละลายในอะซิโตไนไตรล์ 10% เพื่อเตรียมสารละลายมาตรฐานหลายระดับความเข้มข้นของมวล 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0, 20.0, 40.0 และ 80.0μกรัม/มล. ถ่ายเทสารละลายมาตรฐานแต่ละชนิดปริมาณ 5 มล. ลงในหลอดทดลองมีฝาปิดขนาด 15 มล. แยกกัน เติมสารละลายโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ 50% ปริมาณ 0.1 มล. อย่างแม่นยำ และวอร์เท็กซ์เป็นเวลา 15 วินาที จากนั้นเติมสารละลายกรดฟอสฟอริก 50% ปริมาณ 0.2 มล. อย่างแม่นยำ และวอร์เท็กซ์อีกครั้งเป็นเวลา 15 วินาที ปั่นเหวี่ยงที่ 8000 รอบ/นาที เป็นเวลา 5 นาที กรองซุปเปอร์เนเทนผ่านเมมเบรนกรองขนาดเล็กก่อนการวิเคราะห์

2.1.2 สารละลายตัวอย่างทดสอบ:

ชั่งตัวอย่างอาหาร 5 กรัม ลงในภาชนะ เติมสารละลายอะซิโตไนไตรล์ 10% ปริมาณ 50 มล. และผสมเป็นเวลา 30 วินาที วางบนเครื่องเขย่าและเขย่าเป็นเวลา 30 นาที ปั่นเหวี่ยงที่ 8000 รอบ/นาที เป็นเวลา 5 นาที และเก็บซุปเปอร์เนเทนไว้ใช้ภายหลัง ถ่ายเทซุปเปอร์เนเทนข้างต้นปริมาณ 5 มล. ลงในหลอดทดลองมีฝาปิดขนาด 15 มล. อย่างแม่นยำ เติมสารละลายโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ 50% ปริมาณ 0.1 มล. อย่างแม่นยำ และวอร์เท็กซ์เป็นเวลา 15 วินาที จากนั้นเติมสารละลายกรดฟอสฟอริก 50% ปริมาณ 0.2 มล. อย่างแม่นยำ และวอร์เท็กซ์อีกครั้งเป็นเวลา 15 วินาที ปั่นเหวี่ยงที่ 8000 รอบ/นาที เป็นเวลา 5 นาที กรองซุปเปอร์เนเทนผ่านเมมเบรนกรองขนาดเล็กก่อนการวิเคราะห์ เตรียมสารละลายตัวอย่างทดสอบคู่ขนานสองชุด

2.1.3 สารละลายทดสอบการคืนกลับ:

ถ่ายเทซุปเปอร์เนเทนของตัวอย่างปริมาณ 2.5 มล. และสารละลายมาตรฐานแต่ละระดับปริมาณ 2.5 มล. ลงในหลอดทดลองมีฝาปิดขนาด 15 มล. อย่างแม่นยำ เติมสารละลายโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ 50% ปริมาณ 0.1 มล. อย่างแม่นยำ และวอร์เท็กซ์เป็นเวลา 15 วินาที จากนั้นเติมสารละลายกรดฟอสฟอริก 50% ปริมาณ 0.2 มล. อย่างแม่นยำ และวอร์เท็กซ์อีกครั้งเป็นเวลา 15 วินาที ปั่นเหวี่ยงที่ 8000 รอบ/นาที เป็นเวลา 5 นาที กรองซุปเปอร์เนเทนผ่านเมมเบรนกรองขนาดเล็กก่อนการวิเคราะห์

3. ผลการทดลอง

3.1 ความเป็นเชิงเส้นและช่วง

ตารางที่ 4 ตารางความเข้มข้นของกราฟมาตรฐาน

รูปที่ 1 กราฟมาตรฐานของเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อก

หมายเหตุ: นำสารละลายมาตรฐานอ้างอิงเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อกในปริมาณที่เหมาะสมมาเจือจางเป็นลำดับเพื่อเตรียมกราฟมาตรฐาน ช่วงความเป็นเชิงเส้นคือ 0.5—80.0 μกรัม/มล. และค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R) คือ 0.99983 แสดงถึงความเป็นเชิงเส้นที่ยอดเยี่ยมของสารวิเคราะห์

3.2 ความแม่นยำ

รูปที่ 2 โครมาโทแกรมที่ซ้อนทับกันของการทดสอบความแม่นยำสำหรับมาตรฐานอ้างอิง (20.0 μกรัม/มล.)

ตารางที่ 5 ข้อมูลการทดสอบความแม่นยำสำหรับมาตรฐานอ้างอิง (20.0 μกรัม/มล.)

หมายเหตุ: ฉีดสารมาตรฐานอ้างอิงเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อก (ที่ความเข้มข้น 20.0μกรัม/มล.) ซ้ำ 6 ครั้ง ค่าความสามารถในการทำซ้ำ (RSD) ของเวลาคงที่คือ 0.084% และของพื้นที่พีคคือ 0.391% แสดงถึงความแม่นยำของเครื่องมือที่ดี

3.3 การคืนกลับ

รูปที่ 3 โครมาโทแกรมที่ซ้อนทับกันของการทดสอบการคืนกลับของเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อกในอาหารสัตว์

ตารางที่ 6 ข้อมูลการทดสอบการคืนกลับของเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อกในอาหารสัตว์

หมายเหตุ: ตัวอย่างถูกเติมสารมาตรฐานอ้างอิงที่ความเข้มข้น 40.0μกรัม/มล. และวิเคราะห์ตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ข้างต้น ค่าการคืนกลับที่ได้คือ 88.56% แสดงถึงความแม่นยำของวิธีที่ดี

3.4 ขีดจำกัดการตรวจวัด (LOD)

รูปที่ 4 โครมาโทแกรมของมาตรฐานเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อก (2.5μกรัม/มล.)

ตารางที่ 7 ข้อมูลการทดสอบสำหรับมาตรฐานอ้างอิงเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อก (2.5μกรัม/มล.)

หมายเหตุ: จากข้อมูลการทดสอบมาตรฐานอ้างอิงเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อกที่ 2.5 μกรัม/มล. ดังแสดงในตารางข้างต้น ขีดจำกัดการตรวจวัดทางทฤษฎี (LOD) คำนวณได้เท่ากับ 0.033 μกรัม/มล. ที่อัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวน 3 (S/N = 3)

3.5 การทดสอบตัวอย่างอาหารสัตว์

รูปที่ 5 โครมาโทแกรมของตัวอย่างอาหารสัตว์

หมายเหตุ: ตรวจพบเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อกในตัวอย่างอาหารสัตว์ที่ความเข้มข้น 0.402μกรัม/มล.

4. สรุป

การทดลองนี้ดำเนินการตามมาตรฐาน "การกำหนดเมไทโอนีน ไฮดรอกซี อนาล็อกในอาหารสัตว์ด้วยโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง" (GB/T 19371-2025) โดยใช้เครื่องโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงรุ่น Wayeal LC3400 series ที่ติดตั้งเครื่องตรวจวัด UV ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่าพีคเป้าหมายมีรูปร่างสมมาตรที่ดีและมีจำนวนเพลตทฤษฎีสูง ในช่วงความเข้มข้น 0.5—80.0μกรัม/มล. ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R) สูงกว่า 0.9998 ค่า RSD สำหรับเวลาคงที่และพื้นที่พีคของมาตรฐานอ้างอิง MHA (20.0μกรัม/มล.) คือ 0.084% และ 0.391% ตามลำดับ แสดงถึงความแม่นยำของเครื่องมือที่ยอดเยี่ยม ค่าการคืนกลับของ MHA ในตัวอย่างอาหารสัตว์ที่เติมสารมาตรฐานที่ความเข้มข้น 40.0μกรัม/มล. คือ 88.56% แสดงถึงความแม่นยำของวิธีที่ดี ขีดจำกัดการตรวจวัดทางทฤษฎี (LOD) สำหรับ MHA ถูกกำหนดไว้ที่ 0.033μกรัม/มล. ตรวจพบ MHA ในตัวอย่างอาหารสัตว์ที่ความเข้มข้น 0.402μกรัม/มล. ได้สำเร็จ ข้อมูลทั้งหมดข้างต้นเป็นไปตามข้อกำหนดของวิธีเภสัชตำรับสำหรับประสิทธิภาพของเครื่องมือ