การหาปริมาณสเปกติโนมัยซินด้วยเครื่องโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง Wayeal พร้อมเครื่องตรวจวัด ELSD

เครื่องตรวจจับการกระจายแสงแบบระเหย (ELSD) เป็นเครื่องตรวจจับมวลใหม่ที่มีการใช้ในทฤษฎีกับสารประกอบใด ๆ ที่สามารถสร้างอนุภาคเป็นก๊าซได้ฉบับปี 2025 ของ Pharmacopoeia ระบุการใช้การตรวจจับแสงระบายด้วยการระเหย (ELSD) สําหรับการวิเคราะห์และการควบคุมคุณภาพของยาชนิดกว่า 100 ชนิดในความเป็นจริง ELSD ถูกนําไปใช้ในส่วนที่มักจะใช้กับสารประกอบที่ขาดการดูดซึมแสงสว่างจากแสงสว่าง ultraviolet (UV) เช่น astragaloside, carbohydrates, aminoglycosides และ cholesterolมักใช้เป็นวิธีการตรวจสอบที่สมบูรณ์แบบกับเครื่องตรวจจับ UV และเครื่องตรวจจับแสงสว่างอย่างไรก็ตาม ผลการตรวจ ELSD มีอิทธิพลจากปัจจัยหลายอย่าง รวมถึงการประกอบระยะเคลื่อนย้าย, ความเข้มข้นของสารละลายอินทรีย์, รูปแบบการระบาย, และสภาพการหมอกเพื่อให้เกิดผลการวิเคราะห์ที่แม่นยําและสม่ําเสมอ, มันจําเป็นที่จะประเมินผลกระทบของปัจจัยเหล่านี้ต่อผล.
การศึกษานี้, อ้างอิงวิธีการวิเคราะห์สําหรับ spectinomycin hydrochloride จากส่วนที่ II ของ Pharmacopoeia 2025 และนําทางโดยหลักการ ICH QbD,ใช้การออกแบบการทดลองแบบตรงข้าม เพื่อกรองและปรับปรุงสภาพการวิเคราะห์.

รูปที่ 1 สเปคติโนไมซินไฮโดรคลอรีด

2เครื่องมือและวิธีการ

ในการศึกษานี้ การวิเคราะห์โครมาโตกราฟฟิกถูกดําเนินการโดยใช้ระบบ HPLC ของ Wayeal® ซีรีย์ LC3200ช่องคอลัมน์การควบคุมระบบและการสกัดข้อมูล / การประมวลผลถูกดําเนินการด้วยโปรแกรมโครมาโตเกอรี่ SmartLab 2.0

ตารางที่ 1 สภาพ HPLC

3การเตรียมสารละลาย

น้ํายาตัวอย่าง:โซลูชั่นหลักของสเปคติโนไมซินไฮโดรคลอรไดถูกนํามาโดยลูกค้า ด้วยปริมาณความเข้มข้นที่ติดป้าย 10 mg/ ml และความบริสุทธิ์ 99.8%

0.1M โซลูชั่นน้ําของกรด trifluoroacetic:ละเอียด pipette 6.8mL ของกรด trifluoroacetic ในกล่องขนาด 1000mL. ลดน้ําให้ละเอียดกับเครื่องหมายด้วยน้ําสะอาดและผสมให้ดี. ในที่สุดกรองโลหิตผ่าน 0.เครื่องกรองผิวเซลลูโลส 45μm ก่อนใช้.

การแก้ไขมาตรฐาน:โซลูชั่นพื้นฐานถูกละลายด้วยน้ําสะอาดเพื่อเตรียมตัวอย่าง โซลูชั่นที่มีปริมาณ 0.150, 0250, 0350, 050, และ 0.70mg/mL ตามลําดับ แต่ละละสารละลายถูกกรองผ่านกรองเยื่อเซลลูโลส 0.45μm ก่อนการใช้

4ผลและการหารือ

สารแพทยศาสตร์จีนใช้สภาพโครมาโตกราฟิคที่เหมือนกันในการวิเคราะห์สารที่เกี่ยวข้องและสารประกอบหลักภายใต้รายการ spectinomycin hydrochlorideวิธีการระบุว่า "ตัวตรวจจับสามารถตั้งค่าขึ้นอยู่กับสถานการณ์จริง"ระหว่างการศึกษา พิจารณาลักษณะเครื่องมือของ ELSD3260, ความต้องการของวิธีการวิเคราะห์, และหนังสือที่เกี่ยวข้องการออกแบบการทดลองของ Plackett-Burman ได้ถูกใช้ในการคัดกรองปารามิเตอร์การทดลองหลายตัว (ตารางที่ 2 และ 3)ต่อมา, การออกแบบ Box-Behnken (ตาราง 4) ได้ถูกนําไปใช้เพื่อปรับปรุงการตอบสนองของพื้นที่สูงสุดของตัวตรวจจับ ELSD.

ตารางที่ 2 การออกแบบการทดลอง Plackett-Burman

ตารางที่ 3 การวิเคราะห์ ANOVA ของผลการทดลอง Plackett-Burman

ดังที่เห็นจากตารางที่ 3 อัตราการไหลของก๊าซ อัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่ และการชดเชยหลังคอลัมน์แสดงผลลบ โดยเฉพาะอย่างยิ่งการลดอัตราการไหลของก๊าซและอัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่พร้อมกับการปิดการชดเชยหลังคอลัมน์, สามารถเพิ่มการตอบสนองของจุดสูงของโครมาโตเกรฟิก แต่การลดอัตราการไหลของระยะเคลื่อนที่อาจนําไปสู่การขยายจุดสูงและความรู้สึกการตรวจจับที่ลดลงอัตราการไหลผ่านถูกรักษาให้สอดคล้องกับวิธีมาตรฐานขณะที่อุณหภูมิคอลัมน์และอุณหภูมิการตรวจพบแสดงผลบวก พวกเขาไม่ได้เพิ่มค่าการตอบสนองอย่างสําคัญการศึกษาต่อ ๆ ไปจะเน้นการปรับปรุงอัตราการไหลของก๊าซ, อุณหภูมิของเครื่องปนเปื้อน และอุณหภูมิของเครื่องเป่า

ผลของอัตราการไหลของก๊าซ อุณหภูมิของเครื่องปนเปื้อนและอุณหภูมิของเครื่องเหยื่อบนค่าการตอบสนองถูกวิจัยโดยใช้การออกแบบการทดลอง Box-Behnken ภายในกรอบวิธีการผิวตอบสนองการออกแบบการทดลองถูกนําเสนอในตาราง 4

ตารางที่ 4 การออกแบบการทดลอง Box-Behnken

The detection conditions for spectinomycin hydrochloride were determined by simulating the peak area variation using response surface methodology (Figure 2) and considering the instrumental parameter ranges: อุณหภูมิของเครื่องปนเปื้อน 85°C อุณหภูมิของเครื่องปันเปื้อน 80°C อุณหภูมิของเครื่องตรวจจับ 50°C และอัตราการไหลของก๊าซ 0.2 SLM

A. ผลของอัตราการไหลของก๊าซและอุณหภูมิของอุปกรณ์ระเหยบนพื้นที่สูงสุด

B. ผลของอัตราการไหลของก๊าซและอุณหภูมิของเนบูเลเซอร์บนพื้นที่สูงสุด

C. ผลของอุณหภูมิเนบูเลเซอร์และอุณหภูมิของอีวาเปอร์ในพื้นที่สูงสุด

รูปที่ 2 ความแตกต่างในพื้นที่สูงสุด

ความแม่นยําในการฉีด

โรคสะเก็ดเงินของ spectinomycin hydrochloride ได้ถูกละลายเป็น 0. 35 mg/ ml และมีการฉีด 6 ครั้งติดต่อกัน ภายใต้สภาพโครมาโตเกราฟิคที่กําหนดไว้ โดยมีการบันทึกโครมาโตเกราฟิคความหันมาตรฐานสัมพันธ์ (RSD%) ของเวลาการเก็บรักษาและพื้นที่จุดสูงสําหรับจุดสูงของสเปคติโนมิซินไฮโดรคลอรไดโครมาโตเกรดผลปรากฏในตารางที่ 5

ตารางที่ 5 ผลการทดสอบความแม่นยําในการฉีด

ความเฉพาะ

ตามแนวทาง ICH Q2 ((R2) เรื่องการรับรองวิธีการวิเคราะห์ และบททั่วไปของ Chinese Pharmacopoeia บทที่ 9101 แนวทางการรับรองวิธีวิเคราะห์วิธีที่ปรับปรุงได้ถูกรับรองว่ามีความเฉพาะความแม่นยําและการซ้ํา

น้ําสะอาดและสารละลายตัวอย่าง (0.35 mg/mL) ถูกวิเคราะห์พร้อมกันกับโครมาโตแกรมที่บันทึกผล (รูป 3) แสดงว่าไม่มีจุดสูงในระยะเวลาการเก็บรักษาของ spectinomycin hydrochloride ในโครมาโตแกรมน้ําสะอาดขณะที่จุดสูงของสเปคติโนไมซินไฮโดรคลอริดในสารแก้วตัวอย่างได้แยกเส้นเบื้องต้นจากจุดสูงที่อยู่ใกล้เคียง (R > 1.5)

รูปที่ 3 ผลการวิเคราะห์ของตัวอย่าง Spectinomycin Hydrochloride (0.35mg/mL)

ระยะเส้น

เตรียมตัวอย่างสามตัวแบบคู่ของสารสกัดของ spectinomycin hydrochloride ตามวิธีการเตรียมสารสกัดแบบมาตรฐาน และวิเคราะห์มันในสภาพโครมาโทกราฟิกและบันทึกโครมาโตแกรม. ทําการวิเคราะห์การลดลง โดยใช้พื้นที่จุดสูงของโครมาโตเกรฟิกและปริมาณปริมาณที่ตรงกัน

รูปที่ 4 ผลการทดสอบเส้นตรง (Log-Transformed vs. Untransformed)

ตามวรรณคดี ความสัมพันธ์ระหว่างค่าการตอบสนอง ELSD และปริมาณปริมาณจําเป็นต้องแปลงลอกอาริธมิกของค่าการตอบสนองและปริมาณปริมาณก่อนการดําเนินการวิเคราะห์การลดลง [8],9หลังจากนําแปลงโลการิธม์ไปใช้กับข้อมูลการทดลอง คออเรเลชั่นของเส้นโค้งการลดลงเส้นตรงเกิน 0999, ซึ่งดีกว่าผลที่ได้รับโดยไม่ต้องแปลงโลการิทมิก (เช่นที่แสดงในรูป 4)

ความ แม่น และ สามารถ ทํา ซ้ํา ได้

สเปคติโนไมซินไฮโดรคลอรไดร์สตาร์คซูลูชั่นถูกละลายเป็นปริมาณ 0250, 035และ 0.50mg/mL สําหรับความเข้มข้นแต่ละตัวอย่าง ได้เตรียมตัวอย่างสามตัวคู่เคียง วิเคราะห์ภายใต้สภาพโครมาโตเกอฟิกที่กําหนด และโครมาโตเกมส์ถูกบันทึกเนื้อหาถูกคํานวณโดยใช้เส้นโค้งการลดลง, และการประเมินการฟื้นฟูและการซ้ําผล

ตารางที่ 6 ผลการทดสอบการฟื้นฟู

ขั้นต่ําการกําหนดปริมาณ (LOQ)

น้ํายาสเตรปโตไมซินไฮโดรคลอรไดสต็อปซิน (streptomycin hydrochloride) ให้ละลายเป็นปริมาณ 12μg/mL การวิเคราะห์ตัวอย่างในสภาพโครมาโตเกราฟิก และบันทึกโครมาโตเกราฟิกคํานวณสัดส่วนสัญญาณกับเสียง (S/N) ของจุดสูงของสเตรปโตไมซินไฮโดรคลอรีดและกําหนดความซ้ําของสเตรปโตไมซินผลปรากฏในตารางที่ 7

ตาราง 7 ผลการทดสอบ LOQ

ผลการทดลองแสดงว่าตามความต้องการแนวทาง ICH ของ S/N > 10ความหันมาตรฐานสัมพัทธ์ของพื้นที่สูงสุดสําหรับปริมาณปริมาณของสารละลาย spectinomycin hydrochloride นี้ ตอบสนองเกณฑ์ดังนั้นมันจึงสามารถใช้เป็นมาตรฐานขีดจํากัดปริมาณสําหรับ spectinomycin hydrochloride

5สรุป

โดยใช้วิธีการ pharmacopoeial การศึกษานี้ได้กําหนดวิธีการวิเคราะห์ที่น่าเชื่อถือและแข็งแกร่งสําหรับการกําหนดปริมาณของ spectinomycin hydrochlorideสภาพของเครื่องตรวจจับแสงระบายอากาศ (ELSD) ได้ถูกปรับปรุงเป็นระบบวิธีการที่ปรับปรุงได้แสดงให้เห็นความมั่นคงและความแม่นยําที่ดีขึ้น ความรู้สึกการตรวจจับที่สูงขึ้น และช่วงเส้นตรงที่น่าพอใจ

เครื่องตรวจจับ ELSD3260 เป็น เครื่องตรวจจับความร้อนต่ําแบบแบ่งกระแส ที่ถูกออกแบบและพัฒนาใหม่ เหมาะสําหรับการวิเคราะห์ของสารที่ไม่ลุกลุกและสารที่ลุกลุกครึ่งที่เป็นทางเลือกที่มีคุณค่าสําหรับสารประกอบที่ขาดการดูดซึม UVในการศึกษานี้ การใช้ ELSD3260 สําหรับการวิเคราะห์ของ spectinomycin hydrochloride ส่งผลให้มีค่าการตอบสนองที่ดีและสามารถผลิตใหม่ได้ พร้อมกับความรู้สึกในการตรวจจับที่เพิ่มขึ้นผลการค้นพบเหล่านี้แสดงว่าเครื่องมือนี้เหมาะสําหรับการวิเคราะห์ปริมาณของ spectinomycin hydrochloride.