สารตกค้างไนโตรอิมิดาโซลในเนื้อหมู: วิธีการ LCMS-TQ9200 LC-MS/MS ของ Wanyi ได้รับการตรวจสอบตามมาตรฐาน GB 31658.23-2022
2026-10-21
ไนโตรอิมิดาโซลเป็นยาปฏิชีวนะและยาต้านโปรโตซัวสังเคราะห์ที่ยับยั้งแบคทีเรียไม่ใช้ออกซิเจนและทริโคโมแนดได้อย่างมีประสิทธิภาพ เคยมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในปศุสัตว์และสัตว์น้ำเพื่อควบคุมการติดเชื้อในทางเดินอาหารและโรคโปรโตซัว ซึ่งช่วยเพิ่มอัตราการรอดชีวิต อย่างไรก็ตาม ยาตั้งต้นและสารเมแทบอไลต์ของมันแสดงให้เห็นถึงความเป็นพิษ: มันจะถูกเผาผลาญอย่างรวดเร็วในสัตว์ให้เป็นสารเมแทบอไลต์ที่ออกฤทธิ์หลายชนิด ซึ่งบางชนิดยังคงอยู่ในเนื้อเยื่อได้นานกว่าสารตั้งต้น
การศึกษาทางพิษวิทยาแสดงให้เห็นว่ายาตั้งต้นไนโตรอิมิดาโซลและสารเมแทบอไลต์หลักของมันอาจก่อมะเร็ง ก่อให้เกิดการกลายพันธุ์ และเป็นพิษต่อพันธุกรรม สารตกค้างในอาหารที่มาจากสัตว์เข้าสู่ร่างกายมนุษย์ผ่านห่วงโซ่อาหาร และการบริโภคในปริมาณต่ำเป็นเวลานานสามารถรบกวนการสร้างเม็ดเลือด ทำลายโครโมโซม และเพิ่มความเสี่ยงต่อการกลายพันธุ์ของยีน ดังนั้น จีนจึงได้สั่งห้ามไนโตรอิมิดาโซลในสัตว์ที่ผลิตอาหาร และไม่อนุญาตให้มีสารตกค้างในอาหารที่มาจากสัตว์ ทำให้การทดสอบสารตกค้างที่แม่นยำเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับความปลอดภัยของอาหาร
GB 31658.23-2022 ซึ่งเป็นมาตรฐานความปลอดภัยอาหารแห่งชาติสำหรับสารตกค้างไนโตรอิมิดาโซลในอาหารที่มาจากสัตว์โดยใช้เทคนิค Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry เป็นพื้นฐานทางกฎหมายสำหรับงานนี้ ครอบคลุมยาตั้งต้นและสารเมแทบอไลต์ในเนื้อวัว เนื้อแกะ และเมทริกซ์สัตว์อื่นๆ ห้องปฏิบัติการทดสอบต้องการเวิร์กโฟลว์ที่ได้รับการตรวจสอบสำหรับเนื้อหมู ซึ่งครอบคลุมสารเป้าหมายสี่ชนิด ได้แก่ เมโทรนิดาโซล ไฮดรอกซีเมโทรนิดาโซล ไดเมทริแดโซล และไฮดรอกซีไดเมทริแดโซล รวมถึงสารเมแทบอไลต์ไฮดรอกซีที่ยึดติดและแตกตัวเป็นไอออนได้ยากกว่า ในระดับต่ำกว่า ppb โดยมีการถ่ายเทสารตกค้างต่ำและความแม่นยำที่เสถียรตลอดลำดับการฉีดที่ยาวนาน
| รายการ | การกำหนดค่า |
|---|---|
| ระบบ LC-MS/MS | Wanyi LCMS-TQ9200 triple quadrupole |
| คอลัมน์วิเคราะห์ | C18, 1.6 um, 2.1 x 100 mm |
| เฟสเคลื่อนที่ A | กรดฟอร์มิก 0.1% ในน้ำ |
| เฟสเคลื่อนที่ B | กรดฟอร์มิก 0.1% ในอะซีโตไนไตรล์ |
| อัตราการไหล | 0.3 mL/min |
| อุณหภูมิคอลัมน์ | 40 องศาเซลเซียส |
| ปริมาตรการฉีด | 4 uL |
| อุปกรณ์เสริม | อ่างอัลตราโซนิก, เครื่องผสมแบบหมุน, เครื่องปั่นความเร็วสูง, อ่างน้ำ, เครื่องระเหยไนโตรเจน, เครื่องชั่งวิเคราะห์ |
ชั่งตัวอย่าง 2 กรัม (แม่นยำถึง 0.05 กรัม) ลงในหลอดเหวี่ยง 50 มล. เติมสารละลายมาตรฐานภายในที่เตรียมไว้ 10 uL (ความเข้มข้น 1 ug/mL) ปั่นผสมเป็นเวลา 30 วินาที และตั้งทิ้งไว้ 10 นาที เติมเอทิลอะซิเตต 15 มล. ปั่นผสมเป็นเวลา 2 นาที และเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 5 นาที ถ่ายเทสารละลายส่วนบนและทำการสกัดซ้ำอีกครั้งด้วยเอทิลอะซิเตตอีก 15 มล. รวมสารสกัดทั้งสองและระเหยให้แห้งภายใต้ไนโตรเจนในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส
ละลายสารตกค้างในกรดไฮโดรคลอริก 0.1 โมล/ลิตร ปริมาตร 5 มล. ปั่นผสมเป็นเวลา 1 นาที เติม n-hexane 5 มล. เขย่าเป็นเวลา 1 นาที และเหวี่ยงที่ 5,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 5 นาที ทิ้งชั้น hexane และทำการกำจัดไขมันซ้ำอีกครั้งด้วย hexane อีก 5 มล. ปรับสภาพคาร์ทริดจ์สกัดเฟสของแข็งด้วยกรดไฮโดรคลอริก 0.1 โมล/ลิตร ปริมาตร 3 มล. และเมทานอล 3 มล. ใส่ชั้นน้ำ ล้างด้วยกรดไฮโดรคลอริก 0.1 โมล/ลิตร ปริมาตร 3 มล. และชะล้างด้วยเมทานอล 4 มล. ระเหยสารชะล้างให้แห้งที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียสภายใต้ไนโตรเจน ละลายในน้ำ 0.5 มล. ปั่นผสมเป็นเวลา 1 นาที และกรองก่อนฉีด
| พารามิเตอร์ | ผลลัพธ์ |
|---|---|
| เวลาทำงาน | สารวิเคราะห์สี่ชนิดและมาตรฐานภายในแยกออกจากกันภายใน 8 นาที, พีคสมมาตร, การตอบสนองที่แรง |
| ความเป็นเชิงเส้น | การสอบเทียบแบบจับคู่เมทริกซ์ที่ 2, 4, 20, 40, 200 และ 400 ug/L; R2 สูงกว่า 0.9995 สำหรับสารทั้งสี่ชนิด, ค่าเบี่ยงเบนต่ำกว่าขีดจำกัด 20% |
| LOD และ LOQ | อัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวนสูงกว่า 3 ที่ 0.5 ug/kg และสูงกว่า 10 ที่ 1 ug/kg, ตรงตามข้อกำหนด LOD 0.5 ug/kg และ LOQ 1 ug/kg |
| ความแม่นยำ (n = 6) | RSD ต่ำกว่า 6% ที่ 2 ng/mL และต่ำกว่า 3% ที่ 20 ng/mL, เทียบกับขีดจำกัด 10% |
| การถ่ายเทสารตกค้าง | การฉีดสารเปล่าหลังสารมาตรฐานสูงสุด 400 ng/mL ต่ำกว่าพื้นที่พีคของ LOQ ถึง 20% |
| การกู้คืนสารที่เติมลงไป | 61.8% ถึง 103.35% ที่ 2 ng/mL และ 104.35% ถึง 107.15% ที่ 20 ng/mL, อยู่ภายในข้อกำหนด 60% ถึง 120% |
| ตัวอย่างเนื้อหมูจริง | ไม่พบไนโตรอิมิดาโซลทั้งสี่ชนิด |
การสอบเทียบแบบจับคู่เมทริกซ์ในสารสกัดเนื้อหมูเปล่าช่วยชดเชยการกดไอออนจากเมทริกซ์เนื้อสัตว์และทำให้การวัดปริมาณมีความน่าเชื่อถือในระดับร่องรอย รูปร่างพีคดีโดยไม่มีการหาง ซึ่งยืนยันว่าการสกัดด้วยเอทิลอะซิเตต การกำจัดไขมันด้วย hexane และการทำความสะอาดด้วย SPE สามารถกำจัดสิ่งรบกวนที่ระดับ 1 ug/kg ได้
ระบบ LC-MS/MS Wanyi LCMS-TQ9200 ได้นำเสนอวิธีการที่ได้รับการตรวจสอบสำหรับสารตกค้างไนโตรอิมิดาโซลสี่ชนิดในเนื้อหมูภายใต้ GB 31658.23-2022 พีคสมมาตร, R2 สูงกว่า 0.9995, ความแม่นยำภายใน 10%, การถ่ายเทสารตกค้างน้อยมาก และการกู้คืนภายใน 60% ถึง 120% แสดงให้เห็นว่าเวิร์กโฟลว์ตรงตามข้อกำหนดเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณสำหรับการคัดกรองและยืนยันยาที่ถูกห้ามใช้ในสัตว์ และเป็นพื้นฐานทางเทคนิคที่เชื่อถือได้สำหรับการเฝ้าระวังความเสี่ยงด้านความปลอดภัยของอาหาร
- การได้มาซึ่งข้อมูลแบบ Triple quadrupole MRM ให้ความจำเพาะที่จำเป็นในการยืนยันสารตกค้างที่ถูกห้ามใช้ที่ระดับ 0.5 ug/kg ในเมทริกซ์เนื้อสัตว์ที่มีไขมัน
- เคมี C18 ขนาดต่ำกว่า 2 um บนคอลัมน์ 2.1 มม. ที่ 0.3 มล./นาที แยกสารวิเคราะห์สี่ชนิดได้ภายใน 8 นาที โดยใช้ตัวทำละลายปริมาณน้อย
- มาตรฐานภายในที่ติดฉลากไอโซโทปแก้ไขการสูญเสียการกู้คืนระหว่างการสกัดและ SPE ทำให้ผลลัพธ์มีความเสถียรตลอดชุดการทดลอง
- การกำจัดไขมันด้วย hexane ก่อน SPE ช่วยปกป้องคาร์ทริดจ์และคอลัมน์วิเคราะห์ ยืดอายุการใช้งานในห้องปฏิบัติการวิเคราะห์สารตกค้างที่มีปริมาณงานสูง
